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今天跟老師討論到有關PCR的問題
現在我的templte是長這樣的
adaptor-DNA-adaptor(就是total cDNA兩端接上一段序列，因此有大有小)
我要將他整個放大
因此我用adaptor的primer去進行PCR放大
路老師說，因為小片段的DNA很快就做完了
因此在同樣的反應時間次數裡，小片段的DNA放大量會比大片段的來的多
因此可能大片段的DNA會lost掉很多(相較之下)
乍聽之下似乎有道理後.....
因此在同樣的反應時間次數裡，小片段的DNA放大量會比大片段的來的多
因此可能大片段的DNA會lost掉很多(相較之下)
乍聽之下似乎有道理後.....
當時的我聽聽覺得，恩～～～好像真的是這樣耶...有瑕疵
可是後來想一想不對呀
雖然小片段的比起大片段來說比較快完成
但是....即便是他完成了，可是依舊是停在72度的extention時期
又沒有雙股打開再primer黏上去
做完他也只能晾在那裡，等待extention的時間過去壓
原本有多少就會放大多少呀
可是後來想一想不對呀
雖然小片段的比起大片段來說比較快完成
但是....即便是他完成了，可是依舊是停在72度的extention時期
又沒有雙股打開再primer黏上去
做完他也只能晾在那裡，等待extention的時間過去壓
原本有多少就會放大多少呀
所以基本上PCR該care的應該是次數而不是片段大小才對呀
因此有瑕疵的地方應該是在"多者更多"...
故整個放大下來，如果要繼續進行與vector的ligation
可能會變成原本表現較多的mRNA(cDNA)因為它會更加放大的原因
可能會變成原本表現較多的mRNA(cDNA)因為它會更加放大的原因
所以被接進vector的機會也會變多(當然insert的大小也很有關係)
那這樣有什麼不好???
畢竟我就是要選植有"大量表現的cDNA壓".....
那這樣有什麼不好???
畢竟我就是要選植有"大量表現的cDNA壓".....
所以丫~~~我覺得我今天被路老師唬的一愣一愣的= = (感覺宋老師也是....)
改天再去問一下宋老師意見....
改天再去問一下宋老師意見....
各位
你們覺得我說的有沒有道理?????
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你們覺得我說的有沒有道理?????
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因為太想抒發一下感覺了
所以....PO在PTT2也PO在MSN space...
其實相較下來
我比較擔心的是Taq經過25個cycle的放大，出錯率相對會比較大....
"point mutation!!!"
張婉亘我記取妳的教訓了....
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