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實驗之路怎麼這麼乖舛
吊基因
一開始很順遂的iverse PCR讓我放大出這組operon的後大段部份
前面部分怎麼P就是P不出來
整整卡關一個多月= =
後來決定換probe位置，也換了另一個酵素
終於讓我選殖到了
本想說，最難的部分已經跨過
之後應該很easy了吧
沒想到事實不然
選殖到基因，接下來就是進行表現囉
當然SDS-PAGE 的data不能少
沒想到
跑PAGE之路也這麼不順遂
lyse菌跑PAGE竟然跑不出pattern
花了近一個月找原因
終於找到了
所以後來隨便怎麼跑，pattern就是有出來也很漂亮
但是...noninduce跟induce的怎麼看都沒差異
只好自己安慰自己說
算了~~看不出來沒關係，至少產物要能出的來
所以就進行HPLC分析產物
當然如同以往
初接觸一個新技術，我就是要摸很久
一開始...column無論我怎麼裝總是會漏
鎖的比別人緊，但不知為何就是會漏
只好用工具鎖緊它
(這個部份跑了三次才確定我的column必須用工具鎖緊，別人的都不用Q_Q)
基本操作OK了
當然就是要分析我的產物
把菌養在LB裡，說什麼產物就是不出來
run了三四次後，決定死心換M9培養基看看
因為當時處在自暴自棄的狀態，基本上換M9也只是抱著姑且一試的心情
所以當時的配藥我事後想想好像也很隨便配
沒想到
LC一打，打出我要的peak了
頓時歡聲雷動，超Happy!
但是悲哀的事情來了
沒有再現性沒有再現性沒有再現性!!!!囧
如果說那個peak是曇花"一"現，那我也就認了
問題是.....它有二現耶
為什麼現在做不出來了
花了一個月找原因
包括菌是不是被污染了、藥和inducer的廠牌是不是有關係等等
截至目前為止，還是找不出來原因
唯一最大的不同就是前兩次有peak的培養基是同一批配的
難道其實第一次的培養基其實是配錯的??(囧囧囧囧囧囧)
結果糊裡糊塗的我就做出來了
但是...............我怎麼記得到底哪一種藥加錯了 囧興~
(都怪我當初幹麻隨便配 Q_Q)
為什麼為什麼為什麼
實驗總是讓我前進一小步
再把我擋住
而且一擋都擋很久(哭~~)
煩死了~~LC可以一個禮拜打兩次，結果data是零!!!!(持續快一個月了.....)
我該慶幸還好我打一枝時間只有5分鐘嗎???
嗚嗚嗚~~~
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